设A1, A2, A3, B1, B2, B3均代表一个蛋白。已知，A1, B1, A2, A3形成一条已被证明的通路：

  • A通路：(A1+B1)→A2→A3

即A1和B1同时存在才能激活A2，然后激活A3.

现在，我们对蛋白B1进行研究，发现它可能参与一条新的通路：

  • B通路：B1→B2→B3

如何设计实验，证明蛋白B1在这条新的通路发挥的功能不依赖于旧有通路呢？

方法一：敲除A1，如果不出现B通路受阻产生的表型b，说明B通路不依赖于A通路。

方法二：敲除B1，出现表型a和表型b，在敲除B1的基础上回补A2，如果只拯救表型a，不拯救表型b，说明B通路不依赖于A通路。

逻辑上两个方法二选一即可，都是充分的。但是因为还存在潜在的CDEFG，以及除了促进的箭头还存在抑制性的箭头的可能，两个都做。

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实例：发现RTCB（B1）可能参与抑制神经元轴突再生（B通路），RTCB mutant中轴突再生增强（表型b）。而已有的历史研究表明，RTCB参与内质网应激UPR途径中的IRE1→XBP1分枝（A通路）。IRE1（A1）响应内质网压力后激活XBP1的剪接，使XBP1从未剪接的XBP1u（also A1）形式转换为剪接后的XBP1s（A2）形式，RTCB参与剪接过程中XBP1 mRNA的连接。作者通过实验证实，XBP1 mutant引起神经元轴突”dysmorphic”的表型（不同于RTCB mutant的表型b）。在RTCB mutant中表达人为连接好的XBP1s（回补A2），UPR途径可以正常激活了（rescue了表型a），但对轴突再生没有影响（不能rescue表型b）。Archease（also A1）对RTCB连接XBP1的mRNA是必需的。而Archease mutant对于轴突再生也无影响（KO A1不产生表型b）。综上，RTCB调控轴突再生的通路独立于它在UPR途径中参与的通路。

实例原文：

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